Los exámenes de laboratorio que se realizan para determinar el grado de compatibilidad entre los receptores y sus potenciales donantes son:
Tipificación de antígenos HLA Clase I (ABC) y Clase II (DR, DQ y DP) de alta definición:
Los antígenos HLA (Antígenos Leucocitarios Humanos) son identificados a partir del DNA obtenido de los leucocitos de los receptores y donantes. Las antígenos HLA presentes en las superficies de las células nucleadas, son las encargadas de que el sistema inmune diferencie lo propio de lo extraño e inducen una respuesta inmune de rechazo en el receptor de un trasplante, por tal motivo es importante buscar el donante más compatible. Los marcadores HLA son únicos para cada receptor y/o donante.
La tipificación de antígenos HLA corresponde a una metodología de biología molecular de reacción en cadena de la polimerasa con sondas específicas (PCR-SSO), las que son analizadas por Fluorometría-Luminex que entregan una alta definición (4 dígitos en su análisis).
Pruebas cruzadas (Alocrossmatch) para trasplante:
Con el fin de evitar la pérdida inmediata del injerto, se realiza esta prueba que sirve para detectar, en el suero de los receptores, la presencia de anticuerpos dirigidos contra los antígenos HLA presentes en las células de su potencial donante. El resultado positivo de esta prueba es una contraindicación que debe ser evaluada para realizar el trasplante junto a otros análisis de anticuerpos en fase sólida.
Esta prueba cruzada detecta en el receptor anticuerpos a-HLA preformados por transfusiones, trasplantes previos o embarazos, contra los antígenos HLA presentes en linfocitos del donante.
Hay distintos métodos, siendo cada uno de ellos afectados por distintos factores, en el laboratorio de Histocompatibilidad, actualmente se realiza Alocrossmatch por citometría de flujo (FCXM).
Metodología de Alocrossmatch por Citometría de Flujo (XMCF), es un método de Inmunofluorescencia indirecta, independiente de complemento, leído en Citómetro de Flujo. Este método es muy sensible pues detecta bajas cantidades de anticuerpos preformados fijadores o no de complemento. Por su alta sensibilidad es indicado en pacientes de mayor riesgo de rechazo humoral o pérdida temprana de injerto, no siendo su positividad, una contraindicación absoluta de trasplante, permitiendo junto a otros análisis estimar el riesgo de trasplante para un paciente determinado.
Detección y monitoreo de anticuerpos anti HLA.
El seguimiento y caracterización inmunológica de los pacientes en lista de espera para trasplante de órgano sólido, requiere la determinación en sangre de la presencia de anticuerpos dirigidos contra los antígenos HLA, a fin de evitar, en lo posible, la ocurrencia de rechazo del órgano trasplantado. Estos estudios nos permiten determinar la existencia o no de estos anticuerpos y conocer hacia qué antígenos HLA específicos se encuentran dirigidos.
Actualmente el laboratorio de Histocompatibilidad realiza estos estudios con la metodología Fluometría Luminex:
Metodología de detección de Anticuerpos anti HLA: esta se realiza por Fluorometría a través de la lectura de estos anticuerpos en equipo Fluoroanalizador-Luminex. Esta metodología permite realizar un número mayor de determinaciones en menos tiempo, con gran especificidad, sensibilidad y con la posibilidad de cuantificar los niveles de los anticuerpos detectados.
Mantención de Seroteca:
Los pacientes en Programa de Trasplante Renal con donante cadáver deben enviar al ISP, todos los meses una muestra de suero, que es almacenada a -20° C, lo que constituye la seroteca. Estas muestras de suero son utilizadas para las pruebas cruzadas con los donantes cadavéricos.
El Centro de trasplante coordina con los centros de diálisis el envío periódico de estas muestras al ISP, de acuerdo a una calendarización entregada anualmente por la Sección de Histocompatibilidad a los centros de trasplante.
Para tales efectos, se realiza determinación de anticuerpos anti HLA a lo menos una vez al año. Un paciente es inactivado de la lista de espera, si la seroteca es descontinuada por más de 3 meses en pacientes sin anticuerpos HLA y por más de 45 días en pacientes con anticuerpos HLA. Si esta situación persiste por más de 1 año se retira al paciente del programa y a su reingreso se considera su tiempo de espera a partir de esa última fecha.
Los pacientes en Programas de trasplante cardiotorácicos (corazón y/o pulmón), envían muestra de suero mensualmente para la seroteca, con la cual se realiza determinación de anticuerpos anti-HLA de acuerdo a algoritmo anual o dependiendo de las solicitudes de los Centros de Trasplante. En este programa no existe inactivación por falta de suero actualizado.
En el caso del Programa de trasplante de tejidos, la solicitud de exámenes de determinación de anticuerpos anti-HLA depende de las necesidades del centro de trasplante.
Para todos los Programas de Trasplante de Órganos Sólidos y Tejidos es importante el envío de seroteca de los receptores, 15 días post transfusión o post infección de importancia clínica, ya que se recomienda realizar determinación de anticuerpos posterior a estos eventos. Estos sueros pueden enviarse fuera de la calendarización programada anualmente.
En el caso de las muestras de suero enviadas para estudios de anticuerpos anti-HLA por de rechazo del injerto, deben incluir detalladamente, las indicaciones de tratamientos farmacológicos que está recibiendo el paciente.